Produiten

D'Manéier wéi Effekter vu simultane Mutatiounen kombinéiere fir enzymatesch Aktivitéit z'änneren ass net einfach virauszegesinn well dës Effekter net ëmmer op linear Manéier additiv sinn.Dofir kann d'Charakteriséierung vun den Effekter vu simultane Mutatiounen vun Aminosaierreschter, déi de Substrat binden, e wesentleche Bäitrag zum Verständnis vun der Substratspezifizitéit vun Enzymen maachen.An der Beta-Glycosidase vu Spodoptera frugiperda (Sfbetagly) interagéiere béid Reschter Q39 an E451 mam Substrat an dëst ass essentiell fir d'Substratspezifizitéit ze definéieren.Duebel Mutanten vu Sfbetagly (A451E39, S451E39 an S451N39) goufen duerch Site-Direkter Mutagenese virbereet, a Bakterien ausgedréckt a gereinegt mat Affinitéitschromatographie.Dës Enzyme goufen charakteriséiert mat p-Nitrophenyl Beta-Galactoside a p-nitrophenyl Beta-Fucoside als Substrate.D'K Cat /Km Verhältnis fir eenzel an duebel Mutanten vun Sfbetagly mat Site-Direkter Mutatiounen op Positiounen Q39 an E451 war benotzt ze weisen, datt den Effet op der fräier Energie vun ESdouble Dolch (Enzym-Iwwergank Staat komplex) vun der duebel Mutatiounen (Gdouble) Daggerxy) ass net d'Zomm vun den Effekter, déi aus den eenzelne Mutatiounen entstinn (Gdouble Daggerx a Gdouble Daggery).Dësen Ënnerscheed am Gdouble Dolch weist datt d'Effekter vun den eenzel Mutatiounen deelweis iwwerlappen.Dofir zielt dësen gemeinsamen Effekt nëmmen eemol am Gdouble Daggerxy.Kristallographesch Donnéeën iwwer Beta-Glykosidasen weisen d'Präsenz vun enger bidentate Waasserstoffbindung mat Reschter Q39 an E451 an déiselwecht Hydroxylgrupp vum Substrat op.Dofir suggeréieren souwuel thermodynamesch a kristallographesch Daten datt d'Rescht Q39 an E451 e géigesäitege Afloss op hir jeweileg Interaktioune mam Substrat ausüben.