Produiten

Fir spezifesch Metabolite vu 5-Fluorouracil (5-FU) an zwee endogen Monophosphatnukleotiden ze quantifizéieren, hu mir eng originell Method entwéckelt baséiert op enger Flëssegchromatographie-Tandem Massespektrometrie (LC-MS / MS).Dësen Assay erlaabt d'Bestëmmung vun: (i) der intrazellulärer Produktioun vu 5-fluor-2'-deoxyuridin-5'-monophosphate (5-FdUMP) aus 5-FU oder 5-fluoro-2'-deoxyuridin (5-FdUrd) , (ii) den Impakt vun 5-FdUMP Konzentratioun op der intracellular 2'-deoxyuridine-5'-monophosphate (dUMP) / thymidine-5'-monophosphate (TMP) Verhältnis, an (iii) der secretion Ausmooss vun 5-FdUMP an 5-FU aus mënschlech kultivéiert Zellen vun ABC Transporter.Ënnert eisen experimentellen Konditiounen, goufen Zellen mat 5-FU oder 5-FUrd incubated.Duerno goufe cellulär Proteine ​​​​vun Methanol ausgefällt.Dës Prozedur huet héich Extraktioun Erhuelung.Zousätzlech, fir 5-FU a 5-FdUMP Sekretioun aus Zellen ze moossen, hu mir d'Quantifizéierung vun dëse Molekülen am Kulturmedium duerchgefouert.Medien goufen entweder direkt injizéiert (5-FU) oder ënner enger zolidder Phase Extraktioun mat Oasis Wax Extraktiounspatroun (5-FdUMP) gaang.D'Trennung vun den Analyten gouf op enger dC18 Atlantis 3,5 μm, (100 mm × 2,1 mm ID) Kolonn mat isokratesche Modus mat Ammoniumformiatbuffer / Methanol / Waasser (5/5/90, v / v) als mobil Phase gemaach.D'Laafzäit huet net méi wéi 6,2 min.D'Analyte goufen an engem Elektrospray-Interface ënner negativ Ion-Modus ioniséiert.Mir validéiert d'Method iwwer eng Rei vun 2,5-150 ng mL -1 no de Verbindungen.Intra- an Inter-assay Variabilitéit war manner wéi 10% iwwer siwen Deeg.All Verbindunge ware stabil an Zellen oder a Kulturmedium, wann d'Proben bei -20 ° C fir op d'mannst zwou Wochen gespäichert goufen, an no dräi Gefrier-Tau-Zyklen.Kee Matrixeffekt gouf a béide Medien observéiert.