Produiten

Neie High-Performance Liquid Chromatography Assay fir Glycosyltransferasen baséiert op Derivatioun mat Anthranilinsäure a Fluoreszenz Detektioun.

Assays goufen entwéckelt mat der eenzegaarteger Etikettéierungschemie vun 2-Aminobenzoinsäure (2AA; anthranilinsäure, AA) fir d'Aktivitéite vu béiden β1-4 Galactosyltransferase (GalT-1) an α2-6 Sialyltransferase (ST-6) duerch High-Performance Flëssegkeet ze moossen chromatography (HPLC) mat fluorescence Detektioun (Anumula KR. 2006. Fortschrëtter an fluorescence derivatization Methoden fir héich-Performance flësseg chromatographic Analyse vun glycoprotein Kuelenhydrater. Anal Biochem. 350: 1-23).N-Acetylglucosamin (GlcNAc) an N-Acetyllactosamine goufen als Akzeptor benotzt an Uridin Diphosphat (UDP) -Galaktose a Cytidin Monophosphat (CMP) -N-Acetylneuraminsäure (NANA) als Spender fir GalT-1 a ST-6, respektiv.Enzymatesch Produkter goufen in situ mat AA markéiert a goufen vun de Substrate op der TSKgel Amide 80 Kolonn mat normale Phasebedéngungen getrennt.Enzym Eenheeten goufen aus de Peak Beräicher duerch Verglach mat der concomitantly derivatized Standarden Gal-β1-4GlcNAc an NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc bestëmmt.Linearitéit (Zäit an Enzym Konzentratioun), Präzisioun (intra- an interassay) an reproducibility fir d'assays sech etabléiert.D'Assays goufen als nëtzlech fonnt fir d'Enzymaktivitéite während der Isolatioun an der Reinigung ze iwwerwaachen.D'Assays waren héich sensibel an hunn gläich oder besser wéi déi traditionell radioaktiv Zocker-baséiert Miessunge gemaach.Den Assay-Format kann och benotzt ginn fir d'Aktivitéit vun aneren Transferasen ze moossen, virausgesat datt d'Kohlenhydratacceptoren e reduzéierenden Enn fir d'Etikettéieren enthalen.En Assay fir Glykoproteinacceptoren gouf mat IgG entwéckelt.Eng kuerz HPLC Profiléierungsmethod gouf entwéckelt fir d'Trennung vun IgG Glykanen (biantennär G0, G1, G2, mono- an disialyléiert), wat d'Bestëmmung vu GalT-1 a ST-6 Aktivitéiten op eng séier Manéier erliichtert huet.Ausserdeem sollt dës Profiléierungsmethod nëtzlech beweisen fir d'Verännerungen an IgG Glykanen a klineschen Astellungen ze iwwerwaachen.