Produiten

D'Analyse vu proteome-breet Phosphorylatiounsevenementer ass ëmmer nach eng grouss analytesch Erausfuerderung wéinst der enormer Komplexitéit vu Proteinphosphorylatiounsnetzwierker.An dëser Aarbecht evaluéieren mir d'Komplementaritéit vu Lys-N, Lys-C, an Trypsin mat Bezuch op hir Fäegkeet fir zur globaler Analyse vum Phosphoproteom bäizedroen.Eng raffinéiert Versioun vum nidderegen pH staarke Kationaustausch gouf benotzt fir effizient N-terminal acetyléiert, phosphoryléiert an net modifizéiert Peptiden ze trennen.Insgesamt 5036 net-redundante Phosphopeptide konnte mat enger falscher Entdeckungsquote vun <1% vun 1 mg Protein mat enger Kombinatioun vun den dräi Enzymen identifizéiert ginn.Eis Donnéeën hunn opgedeckt datt d'Iwwerlappung tëscht de Phosphopeptid Datesets, déi mat verschiddene Proteasen generéiert goufen, marginal war, wärend d'Iwwerlappung tëscht zwee ähnlech generéiert tryptesch Datesets op d'mannst 4 Mol méi héich fonnt gouf.Op dës Manéier huet d'parallel Notzung vu Lys-N an Trypsin eng 72% Erhéijung vun der Unzuel vun detektéierten Phosphopeptide erméiglecht, am Verglach mat Trypsin eleng, wärend e Trypsin Replikat Experiment nëmmen zu enger 25% Erhéijung gefouert huet.Also, wa mir eleng op d'Trypsin a Lys-N Daten fokusséiere, hu mir 4671 netredundant Phosphopeptiden identifizéiert.Weider Analyse vun de festgestallte Siten huet gewisen datt d'Lys-N an d'Trypsin Datesets a wesentlech verschiddene Phosphorylatiounsmotiver beräichert goufen, wat weider beweist datt Multiprotease Approche ganz wäertvoll an Phosphoproteomanalysen sinn.